無菌檢查法 微生物限度檢查法 一次性使用衛生用品微生物檢查方法

1 1 0 0 生物檢查法  中國藥典 2015 年版【節選】

1 1 0 1 無菌檢查法（集菌儀法）

無菌檢查法系用于檢 査藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫療器具、原料 、輔料及其他品種是否無菌的一種方法 。若供試品符合無菌檢查法的規定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染。無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境必須達到無菌檢査的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區、工作臺面及環境應定期按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準進行潔凈度確認。隔離系統應定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。 日常檢驗還需對試驗環境進行監控。

1 . 薄膜過濾法

薄膜過濾法一般應采用封閉式薄膜過濾器。無菌檢査用的濾膜孔徑應不大于0.45pm，直 徑 約 為 50mm。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。使 用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前應先將少量的沖洗液過濾，以潤濕濾膜6 油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且總沖洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。水 溶 液 供 試 品 取規定量，直接過濾，或混合至含不少于 100ml適宜稀釋液的無菌容器中，混勻 ，立即過濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1 份 濾 器 中 加 人 100ml硫乙醇酸鹽流體培養基，1 份 濾 器 中 加 入 100ml胰酪大豆胨液體

培養基。生物制品樣品沖洗后，2 份 濾 器 中 加 入 100ml硫乙醇酸鹽流體培養基，1 份 濾 器 中 加 人 100ml胰酪大豆胨液體培養基。

具有導管的醫療器具（輸血、輸液袋等）供 試 品 取規定量 ，每個最小包裝用50?100ml沖洗液分別沖洗內壁，收集沖洗液于無菌容器中，然后照水溶液供試品項下方法操作。同時應采用直接接種法進行包裝中所配帶的針頭的無菌檢査。

1 1 0 5 非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法（微生物限度儀法）

微生物計數法系用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數。

當本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應的微生物限度標準時，應按下述規定進行檢驗，包括樣品的取樣量和結果的判斷等。除另有規定外，本法不適用于活菌制劑的檢査。

微生物計數試驗環境應符合微生物限度檢查的要求。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期進行監測。

如供試品有抗菌活性，應盡可能去除或中和。供試品檢査 時 ，若使用了中和劑或滅活劑，應確認其有效性及對微生物無毒性。

供試液制備時如果使用了表面活性劑，應確認其對微生物無毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。

計數方法

計數方法包括平皿法、薄膜過濾法和最可能數法（Most-Probable-Number Method, 簡稱 MPN 法）。MPN 法用于微生物計數時度較差，但對于某些微生物污染量很小的供試 品 ，M PN法可能是更適合的方法。

供試品檢查時，應根據供試品理化特性和微生物限度標準等因素選擇計數方法，檢測的樣品量應能保證所獲得的試驗結果能夠判斷供試品是否符合規定。所選方法的適用性須經確認。

計數培養基適用性檢査和供試品計數方法適用性試驗

供 試 品 微 生 物 計 數 中 所 使 用 的 培 養 基 應 進 行 適 用 性檢查。

供試品的微生物計數方法應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產品的微生物計數。

若檢驗程序或產品發生變化可能影響檢驗結果時，計數方法應重新進行適用性試驗。

GB15979-2002 一次性使用衛生用品衛生標準（選）